Иммунологические исследования

Содержание

Иммунологические исследования — диагностические методы, базирующиеся на специфическом взаимодействии антигенов и антител. Широко применяются для лабораторных анализов инфекционных и паразитарных заболеваний, а также достоверного определения групп крови, нарушений гормонального фона, тканевых и опухолевых антигенов, распознавания аллергии и аутоиммунных процессов, видовой принадлежности белка, а также беременности.

Показания к проведению иммунологических исследований

врожденные или приобретенные в ходе жизни иммунодефицитные состояния;
аллергические заболевания, не реагирующие на эффективную терапию;
инфекционные болезни хронического и вялотекущего типа;
аутоиммунные и онкологические болезни;
до и после операции по пересадке органов;
подготовка к серьезным хирургическим вмешательствам;
оценка эффективности разработанного лечения и анализа побочных явлений при назначении препаратов, влияющих на иммунитет.

Иммунологическое исследование крови (иммунограмма) расшифровка:

Иммуноглобулин А (IgA).
Иммуноглобулин Е (IgE).
Иммуноглобулин G (IgG).
Иммуноглобулин М (IgM).
Аллоиммунные антитела.
Антинуклеарный фактор.
Антистрептолизин-О.
Антиспермальные антитела (ИФА).
MAR-тест.
Антитела к тиреоглобулину (АТ-ТГ).
Антитела к тиреоидной пероксидазе (AT-ТПО).
HLA-типирование 2 класса.

Иммуноглобулин А (IgA)

Иммуноглобулин А (IgA) — это антитела, являющиеся защитным фактором слизистых оболочек человеческого организма. Входят в состав фракции б-глобулинов, составляют около 15% от общего количества иммуноглобулинов сыворотки крови. Содержатся в молоке, слюне, слезной жидкости, секретах слизистых оболочек.

Увеличение содержания:

хронические заболевания печени;
системная красная волчанка;
ревматоидный артрит;
миеломная болезнь;
гломерулонефрит;
алкогольное поражение внутренних органов.

Снижение содержания:

физиологическое снижение у детей младше 6 месяцев;
цирроз печени;
лучевая болезнь,
отравления (толуол, бензин, ксилол);
применение цитостатиков и иммунодепрессантов.

Иммуноглобулин Е (IgE)

Иммуноглобулин Е (IgE) принимает участие в аллергических реакциях и противопаразитарном иммунитете.

Увеличение содержания:

паразитарные инвазии (аскариды, нематоды, токсоплазма, шистосома, эхинококки, трихинелла, амебы);
аллергический ринит;
крапивница;
сенная лихорадка;
аллергические заболевания;
бронхиальная астма.

Снижение содержания:

атаксия;
телеангиоэктазии.

Иммуноглобулин G (IgG)

Иммуноглобулин G (IgG) обеспечивает пассивный иммунитет.

Увеличение содержания:

ревматизм;
системная красная волчанка;
ревматоидный артрит;
миеломная болезнь;
ВИЧ;
инфекционный мононуклеоз;
острые и хронические инфекционные заболевания.

Снижение содержания:

физиологическое снижение у детей младше 6 месяцев,
лучевая болезнь,
лечение цитостатиками и иммунодепрессантами,
отравления (толуол, бензин, ксилол),
цирроз печени.

Иммуноглобулин М (IgM)

Иммуноглобулин М (IgM) входит в состав фракции у-глобулинов. Первым появляется после введения антигена. К IgM относятся противоинфекционные антитела, антитела групп крови, ревматоидный фактор.

Увеличение содержания:

острые грибковые, паразитарные, вирусные и бактериальные инфекции,
гепатит и цирроз печени,
ревматоидный артрит,
системная красная волчанка,
кандидоз,
системные васкулиты.

Снижение содержания:

физиологическое снижение у детей младше 6 месяцев,
спленэктомия,
лучевая болезнь,
лечение иммунодепрссантами и цитостатиками,
отравления (толуол, ксилол).

Аллоиммунные антитела

Аллоиммунные антитела — это антитела к клинически наиболее важным эритроцитарным антигенам, в первую очередь, к резус-фактору.

Показания к назначению анализа:

беременность (профилактика резус-конфликта),
наблюдение за беременными с отрицательным резус-фактором,
невынашивание беременности,
гемолитическая болезнь новорожденных,
подготовка к переливанию крови.

Антинуклеарный фактор

Антинуклеарный фактор при определении совместно с антителами к ДНК является диагностические критерием системной красной волчанки.

Повышение показателя:

системная красная волчанка,
хронический гепатит,
ревматоидный артрит,
волчаночный нефрит,
системные васкулиты.

Антистрептолизин-О

Антистрептолизин-О — маркер наличия стрептококковой инфекции в организме, является лабораторным критерием ревматизма.

Показания к назначению анализа:

ревматизм,
гломерулонефрит,
миокардит.

Повышение концентрации:

острый гломерулонефрит,
ревматизм (уровень повышен у 85%),
рожистое воспаление,
скарлатина,
стрептококковые инфекции (ангина, хронический тонзиллит, пиодермия, остеомиелит).

Антиспермальные антитела (ИФА)

Антиспермальные антитела (ИФА) — дополнительный тест в диагностике иммунологических причин бесплодия у мужчин и женщин. Антиспермальные антитела обнаруживаются в крови, в слизи шейки матки, семенной плазме, на поверхности сперматозоидов. У мужчин лучше определять антиспермальные антитела в сперме. Сомнительные (близкие к пороговым) значения: 55-60 Ед./мл. В подобных случаях исследование целесообразно повторить через 2 недели.

Показания к назначению анализа:

необъяснимое бесплодие супружеской пары,
изменения спермограммы.

Повышение значений: вероятный фактор бесплодия.

MAR-тест

MAR-тест (Mixed agglutination reaction) — количественное определение наличия/отсутствия антиспермальных антител класса А с использованием латексных частиц на поверхности сперматозоидов. Тест определяет отношение (процент) нормальных неподвижных сперматозоидов, но покрытых антиспермальными антителами, к общему количеству сперматозоидов.

Показания к назначению анализа:

бесплодный брак,
предполагаемое иммунологические бесплодие у мужчин.

Повышение значения:

высокая вероятность данной причины мужского бесплодия.

Антитела к тиреоглобулину (АТ-ТГ)

Антитела к тиреоглобулину (АТ-ТГ) — антитела к предшественнику тиреоидных гормонов.

Показания к назначению анализа:

новорожденные, высокий уровень антител к тиреоглобулину у матери;
взрослые: хронический тиреоидит Хашимото, диагностика гипотиреоза, зоб, диффузный токсический зоб (болезнь Грейвса).

Повышение концентрации:

хронический тиреоидит Хашимото,
идиоматический гипотиреоз,
аутоиммунный тиреоидит,
диффузный токсический зоб (болезнь Грейвса),
синдром Дауна (слабо положительный результат),
синдром Тернера.

Антитела к тиреоидной пероксидазе (AT-ТПО)

Антитела к тиреоидной пероксидазе (AT-ТПО) — антитела к ферменту клеток щитовидной железы, участвующему в синтезе тиреоидных гормонов, их присутствие — показатель агрессии иммунной системы по отношению к собственному организму. Это наиболее чувствительный тест для обнаружения аутоиммунного заболевания щитовидной железы.

Показания к назначению анализа:

новорожденные: повышенные показатели гормонов щитовидной железы, высокий уровень АТ-Т ПО или болезнь Грейвса у матери;
взрослые: диагностика нарушений уровня гормонов щитовидной железы, зоб, болезнь Грейвса (диффузный токсический зоб), хронический тиреоидит Хашимото, офтальмопатия: увеличение окологлазных тканей (подозрение на эутиреоидную болезнь Грейвса — при нормальных показателях уровня гормонов щитовидной железы).

Повышение концентрации:

болезнь Грейвса (диффузный токсический зоб),
узловой токсический зоб,
подострый тиреоидин (де Кревена),
послеродовая дисфункция щитовидной железы,
хронический тиреоидит Хашимото,
аутоиммунный тиреоидит,
нетиреоидные аутоиммунные заболевания.

HLA-типирование 2 класса

HLA-типирование 2 класса (human leucocyte antigens) — антигены тканевой совместимости (cиноним: MHC — major histocompatibility complex — главный комплекс гистосовместимости). HLA-фенотип определяется методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Это исследование не является рутинным (массовым) и выполняется для диагностики только в сложных случаях:

оценка риска развития ряда заболеваний с известной генетической предрасположенностью,
выяснение причин бесплодия,
выяснение причин невынашивания беременности (привычных выкидышей),
выяснение причин иммунологической несовместимости,
трансплантация органов и тканей,
оценка риска сахарного диабета 1 типа при семейной отягощенности.

НLА антигены 1 класса представлены на поверхности практически всех клеток организма, в то время как белки тканевой совместимости 2 класса располагаются на клетках иммунной системы, макрофагах, эпителиальных клетках.

Благоприятный прогноз пересадки органа выше при наибольшем сходстве донора и реципиента по антигенам тканевой совместимости.

Сходство супругов по антигенам тканевой совместимости приводит к «похожести» что становится причиной недостаточной антигенной стимуляции иммунной системы женщины, и необходимые для сохранения беременности реакции не запускаются. Беременность воспринимается как чужеродные клетки и происходит самопроизвольное прерывание беременности. Эта «чужеродность» является нормальным явлением, запускающим иммунологические реакции, направленные на сохранение беременности. Формируется группа иммунных клеток, вырабатывающих специальные «блокирующие» антитела. При нормальном развитии беременности «блокирующие» антитела к отцовским HLA-антигенам появляются с самых ранних сроков беременности, причем самыми ранними являются антитела к антигенам 2 класса тканевой совместимости.

Нормы

Показатель	Норма
Иммуноглобулин А (IgA)	0,9-4,5 г/л
Иммуноглобулин Е (IgE)	30-240 мкг/л
Иммуноглобулин G (IgG)	7-17 г/л
Иммуноглобулин М (IgM)	0,5-3,5 г/л
Аллоиммунные антитела	отрицательно
Антинуклеарный фактор	отрицательно
Антистрептолизин-О	0-7 лет — менее 100 Ед/мл; 7-14 лет — 150-250 Ед/мл; 14-90 лет — менее 200 Ед/мл
Антиспермальные антитела (ИФА)	0-60 Ед/мл
MAR-тест	менее 50%
Антитела к тиреоглобулину (АТ-ТГ)	титр < 1,10
Антитела к тиреоидной пероксидазе (AT-ТПО)	< 5,6 Ед/мл

1. Миокардит
2. Ревматоидный артрит
3. Остеомиелит бедра
4. Остеомиелит костей голени
5. Остеомиелит пяточного бугра
6. Рожистое воспаление
7. Сахарный диабет (1 и 2 тип)
8. Бронхиальная астма
9. Миелома множественная
10. Кандидоз полости рта
11. Острый гломерулонефрит
12. Эхинококкоз печени
13. Аутоиммунный тиреоидит
14. Острый тонзиллит
15. Вазомоторный и аллергический ринит
16. Хронический тонзиллит
17. Диффузный токсический зоб
18. Кандидоз легких
19. Подострый тиреоидит
20. Скарлатина
21. Инфекционный мононуклеоз
22. Урогенитальный кандидоз
23. Хронический гломерулонефрит
24. Хронический гепатит
25. Цирроз печени
26. Аллергическая крапивница
27. Кандидоз кожи и ногтей
28. Пиодермии
29. Привычный выкидыш
30. Токсоплазмоз
31. Кандидоз новорожденного
32. Гемолитическая болезнь новорожденного
33. СПИД
34. Синдром Гудпасчера
35. Синдром Шегрена
36. Системная красная волчанка
37. Склеродермия
38. Аутоиммунный хронический гастрит
39. Первичный билиарный цирроз печени
40. Узелковый периартериит
41. Хронический бронхит
42. Анафилактический шок
43. Аллергия на укусы насекомых

Ревматоидный артрит
Для ревматоидного артрита характерно увеличение содержания иммуноглобулина А (IgA), иммуноглобулина G (IgG) и иммуноглобулина М (IgM); повышение антинуклеарного фактора.
Остеомиелит бедра
Для остеомиелита характерно повышение концентрации антистрептолизина-О — маркера наличия стрептококковой инфекции в организме.
Остеомиелит костей голени
Для остеомиелита характерно повышение концентрации антистрептолизина-О — маркера наличия стрептококковой инфекции в организме.
Остеомиелит пяточного бугра
Для остеомиелита характерно повышение концентрации антистрептолизина-О — маркера наличия стрептококковой инфекции в организме.
Рожистое воспаление
Для рожистого воспаления характерно повышение концентрации антистрептолизина-О — маркера наличия стрептококковой инфекции в организме.
Бронхиальная астма
Для бронхиальной астмы характерно увеличение содержания иммуноглобулина Е (IgE).
Миелома множественная
Для миеломной болезни характерно увеличение содержания иммуноглобулина А (IgA) и иммуноглобулина G (IgG).
Кандидоз полости рта
Для кандидоза характерно увеличение содержания иммуноглобулина М (IgM).
Острый гломерулонефрит
Для острого гломерулонефрита характерно увеличение содержания иммуноглобулина А (IgA), повышение концентрации антистрептолизина-О — маркера наличия стрептококковой инфекции в организме.
Эхинококкоз печени
Для паразитарных инвазий (в том числе и эхинококка) характерно увеличение содержания иммуноглобулина Е (IgE).
Аутоиммунный тиреоидит
Для аутоиммунного тиреоидита характерно повышение концентрации антител к тиреоглобулину (АТ-ТГ) и к тиреоидной пероксидазе (AT-ТПО).
Острый тонзиллит
При ангине возможно повышение концентрации антистрептолизина-О — маркера наличия стрептококковой инфекции в организме.
Вазомоторный и аллергический ринит
Для аллергического ринита характерно увеличение содержания иммуноглобулина Е (IgE).
Хронический тонзиллит
Для хронического тонзиллита характерно повышение концентрации антистрептолизина-О — маркера наличия стрептококковой инфекции в организме.
Диффузный токсический зоб
Для диффузного токсического зоба характерно повышение концентрации антител к тиреоглобулину (АТ-ТГ) и к тиреоидной пероксидазе (AT-ТПО).
Кандидоз легких
Для кандидоза характерно увеличение содержания иммуноглобулина М (IgM).
Подострый тиреоидит
Для подострого тиреоидита характерно повышение концентрации антител к тиреоидной пероксидазе (AT-ТПО).
Скарлатина
Для скарлатины характерно повышение концентрации антистрептолизина-О — маркера наличия стрептококковой инфекции в организме.
Инфекционный мононуклеоз
Для инфекционного мононуклеоза характерно увеличение содержания иммуноглобулина G (IgG).
Урогенитальный кандидоз
Для кандидоза характерно увеличение содержания иммуноглобулина М (IgM).
Хронический гломерулонефрит
Увеличение содержания иммуноглобулина А (IgA) возможно при гломерулонефрите.
Хронический гепатит
При гепатите печени возможно увеличение содержания иммуноглобулина М (IgM). Антинуклеарный фактор повышен при хроническом гепатите.
Цирроз печени
Снижение содержания иммуноглобулина А (IgA) и иммуноглобулина G (IgG); увеличение содержания иммуноглобулина М (IgM) возможно при циррозе печени.
Аллергическая крапивница
Увеличение содержания иммуноглобулина Е (IgE) возможно при крапивнице.
Кандидоз кожи и ногтей
Для кандидоза характерно увеличение содержания иммуноглобулина М (IgM).
Пиодермии
Концентрация антистрептолизина-О — маркера наличия стрептококковой инфекции в организме — повышена при пиодермии.
Токсоплазмоз
Увеличение содержания иммуноглобулина Е (IgE) возможно при паразитарной инвазии — токсоплазме.
Кандидоз новорожденного
Для кандидоза характерно увеличение содержания иммуноглобулина М (IgM).
СПИД
Увеличение содержания иммуноглобулина G (IgG) возможно при ВИЧ.
Синдром Гудпасчера
Метод непрямой ИФ проявляет сывороточные анти-GВМ-антитела.
Синдром Шегрена
Отмечаетя повышение уровней иммуноглобулинов IgG и IgM; наличие антител к ДНК, LE-клеток, антител к эпителию экзокринных желез, увеличение количества В-лимфоцитов, уменьшение количества Т-лимфоцитов.
Системная красная волчанка
Увеличение содержания иммуноглобулина А (IgA), иммуноглобулина G (IgG), иммуноглобулина М (IgM) возможно при системной красной волчанке. Антинуклеарный фактор при определении совместно с антителами к ДНК является диагностическим критерием системной красной волчанки, при ней он повышен.
Склеродермия
Выявляются специфичные для склеродермии аутоантитела.
Аутоиммунный хронический гастрит
При аутоиммунном хроническом гастрите отмечается снижение IgA и IgG, повышение уровня В-лимфоцитов и Т-хелперов более чем в 6 раз, появление аутоантител к париетальным клеткам и гастромукопротеину.
Первичный билиарный цирроз печени
При первичном билиарном циррозе печени иммунологическое исследование обнаруживает антимитохондриальные антитела (АМА) — высокоспецифичный маркер ПБЦ, в титре выше 1:40, повышение уровня IgM и IgG.
Узелковый периартериит
Увеличение содержания иммуноглобулина М (IgM), повышение антинуклеарного фактора возможно при системных васкулитах.

Иммунологические исследования

иммунологические исследования

Используются для выявления иммунодефицитных состояний организма, аутоиммунных заболеваний и аллергий, различных инфекций и паразитарных инвазий, опухолевых антигенов, нарушений гормонального фона. Также применяются как экспресс-метод точного определения группы крови и для определения беременности.

Что такое антитела

Важную роль в защите человека от агрессии внешней среды выполняет иммунитет.

Когда в организм попадает антиген — чужеродный агент, в крови начинают вырабатываться антитела.

Антитела или иммуноглобулины — специфические белки, которые выделяются В-лимфоцитами. Их задача — устранение именно того «агрессора», который угрожает организму в данный момент. Это значит, что они действуют избирательно.

Антитела, прикрепляясь к антигенам, обездвиживают их, и при этом сигнализируют другим клеткам — участникам иммунного процесса, о необходимости запуска реакции, и о том куда именно ее направить.

На некоторые перенесенные инфекции существует иммунная память — в крови остаются антитела к определенному антигену.

Наличие или отсутствие определенного класса иммуноглобулинов может многое рассказать о состоянии организма человека.

Всего существует пять классов иммуноглобулинов: G, А, М, D. В зависимости от их количества и сочетания можно судить о состоянии здоровья человека и характере заболевания.

Когда назначается иммунологический анализ крови

Иммунологическое исследование крови позволяет получить четкую картину состояния иммунной системы организма, наличие иммунодефицита, как врожденного, так и приобретенного, выявить наличие и характер хронических заболеваний.

Иногда возникают сбои работы иммунитета и организм атакует сам себя (аутоиммунные заболевания). Их также легко обнаружить, используя иммунологическое серологическое исследование.

Данный вид исследования назначают в следующих случаях если:

инфекционное заболевание носит длительный и трудно поддающийся лечению характер;
есть подозрение на врожденный иммунодефицит;
возможна вероятность приобретенного иммунодефицита, в том числе вызванный ВИЧ;
вероятны аутоиммунные заболевания;
наблюдаются аллергические реакции;
возникает подозрение на онкологические процессы;
планируется сложное хирургическое вмешательство;
требуется определить причины мужского или женского бесплодия;
необходимо контролировать результат применения гормональных препаратов или иммунодепрессантов;

При помощи иммунологического лабораторного исследования можно диагностировать следующие заболевания:

иммунодефицитные состояния как врожденные, так и приобретенные, в том числе СПИД;
аутоиммунные заболевания: ревматоидный артрит, системная красная волчанка;
заболевания органов ЖКТ;
половые инфекции;
злокачественные новообразования;
заболевания щитовидной железы нарушение её функции;
аллергии с выявлением аллергенов;
токсоплазмоз;
гепатит В и С;
герпес;
резус конфликт матери и плода;
кандидоз;
цитомегаловирусная инфекция;
гломерулонефрит;
миокардит;
остеомиелит.

Это далеко не полный перечень диагнозов, для окончательной диагностики обязательно используется иммунограмма, как дополнительный метод.

иммунологические исследования

Исследование иммунной системы включает в себя определение клеточного состава крови и определение наличия антигенов и антител в сыворотке крови.

На 1-м этапе рассматривается клеточный состав крови:

общее число лимфоцитов;
соотношение Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов;
фагоцитарная активность нейтрофилов;
апоптоз лимфоцитов;
продуктивность В-лимфоцитов по общему количеству иммуноглобулинов.

Это исследование позволяет определить общее состояние и напряженность иммунитета.

На 2-м этапе исследуется гуморальная активность иммунных клеток:

определяется концентрация цитокининов;
измеряется количество и соотношение видов иммуноглобулинов;

При диагностике конкретных заболеваний определяется наличие антигена или антител к нему в сыворотке крови.

Нормы

Рассмотрим основные параметры иммунологического исследования.

Иммуноглобулин А (IgA) участвует в защитной реакции слизистых оболочек органов человека. Превышение нормы по этому параметру может свидетельствовать:

о артрите;
гломерулонефрите;
миеломной болезни;
воспалительных процессах в печени.

Недостаток иммуноглобулина А наблюдается:

при циррозе печени;
токсических состояниях;
лучевой болезни

Иммуноглобулин М (IgM) выделяется как экстренный ответ на проникновение антигена.

Его количество резко увеличивается:

при вирусных или бактериальных инфекциях;
паразитарных инвазиях;
аутоиммунных процессах;

Снижение показателя бывает:

при остром или накопительном отравлении;
лучевой болезни;
приеме иммунодепрессантов.

Иммуноглобулин G (IgG) обеспечивает пассивную защиту.

иммунологические исследования

Превышение показателя выше нормы выявляется:

при ревматоидном артрите;
системной красной волчанке;
СПИД;
миеломной болезни;
хронических инфекционных заболеваниях.

Показатель резко снижается:

при отравлениях;
терапии иммунодепрессантами;
лучевой болезни;
циррозе печени.

Для выявления аллергических заболеваний важно знать уровень иммуноглобулина Е (IgE). Резкое увеличение значения возникает:

при поллинозе;
крапивнице;
пищевой аллергии;
наличии паразитов;
аллергии на лекарственные препараты.

Снижение уровня свидетельствует:

о приобретенном вирусном и невирусном иммунодефиците;
врожденном иммунодефиците;
приеме иммунодепрессантов.

Сама по себе иммунограмма не является медицинским заключением и для ее расшифровки требуется опытный иммунолог.

Подготовка к исследованию

Иммунологические исследования относятся к серологическим (исследованиям сыворотки крови). Для этого анализа используется венозная кровь, взятая натощак утром. Чтобы результаты были максимально достоверными следует соблюдать определенные правила:

За 12 часов до взятия крови прекратить прием пищи. Пить можно только чистую воду.
За трое суток до анализа исключить алкогольные напитки.
Не курить минимум час до взятия крови.
Исключить солярий, рентгенологические исследования за двое суток;
По возможности избегать стрессов за сутки до диагностики;
Исключить нездоровую пищу (жареное, копченое, соленое, жирное) из рациона за двое суток до взятия крови.
Если нет жизненных показаний, исключить любые препараты, особенно гормональные. Если нет возможно отменить препараты, об их приеме обязательно предупредите врача.
Женщинам не стоит назначать анализ на время менструации.

Важно! Несоблюдение этих простых правил может исказить результаты диагностики.

Литература:

Wise, «Review of the History of Medicine» (Л., 1967).
Patil H., Tiwari R. V., Repka M. A. Recent advancements in mucoadhesive floating drug delivery systems: A mini-review. Journal of Drug Delivery Science and Technology. 2016; 31: 65–71.DOI: 10.1016/j.jddst.2015.12.002.
Скориченко, «Доисторическая M.» (СПб., 1996); его же, «Гигиена в доисторические времена» (СПб., 1996).
https://online-diagnos.ru/analiz/immunologicheskie-issledovaniya.
https://polyclin.ru/articles/immunologicheskie-issledovanija/.
З.С. Смирнова, Л.М. Борисова, М.П. Киселева и др. Противоопухолевая активность соединения ЛХС-1208 (N-гликозилированные производные индоло[2,3-а]карбазола) // Российский биотерапевтический журнал 2010. № 1. С. 80.
Скориченко, «Доисторическая M.» (СПб., 1996); его же, «Гигиена в доисторические времена» (СПб., 1996).
Мирский, «Медицина России X—XX веков» (Москва, РОССПЭН, 2005, 632 с.).
Debjit B., Rishab B., Darsh G., Parshuram R., Sampath K. P. K. Gastroretentive drug delivery systems- a novel approaches of control drug delivery systems. Research Journal of Science and Technology;10(2): 145–156. DOI: 10.5958/2349-2988.2018.00022.0.