Антинуклеарный фактор (АНФ, HEp-2, титры. Антинуклеарные антитела методом непрямой иммунофлюоресценции на препаратах HEp-2-клеток; ANA IF, titers)

Антинуклеарный фактор на HEp-2 клетках, IgG

[13-045] Антинуклеарный фактор на HEp-2 клетках, IgG

1100 руб.

Метод исследования с использованием человеческих эпителиальных клеток HEp-2, который позволяет обнаружить антинуклеарные антитела — один из маркеров системных заболеваний соединительной ткани.

Синонимы русские

АНФ, антиядерные антитела, антинуклеарные антитела (АНА).

Синонимы английские

Antinuclear Antibodies (ANA), Hep-2 Substrate, ANA-Hep2, Fluorescent AntiNuclear Antibody detection (FANA).

Метод исследования

Непрямая реакция иммунофлюоресценции.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) является «золотым стандартом» выявления антинуклеарных антител (АНА) и диагностики аутоиммунных заболеваний.

Патогенез системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ) тесно связан с нарушениями в иммунной системе и повышенной выработкой антител к структурам собственных клеток. Аутоантитела к компонентам ядра клеток — антинуклеарные антитела — взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами и белками ядра, антигенами цитоплазмы, что проявляется воспалительными изменениями в тканях и органах, болями в суставах и мышцах, выраженным утомлением, потерей веса, кожными изменениями. АНА обнаруживаются при многих аутоиммунных заболеваниях, но наиболее характерны для системной красной волчанки (СКВ). АНА встречаются более чем у 90 % больных системными заболеваниями соединительной ткани, в настоящее время описано около 200 разновидностей, которые объединены единым названием — антинуклеарный фактор.

При определении АНФ методом непрямой флюоресценции чаще используется перевиваемая линия эпителиальных клеток аденокарциномы гортани человека НЕр-2. Клетки НЕр-2 являются очень удобным субстратом для лабораторного исследования, так как обладают крупными ядрами и на стеклах растут в один слой. АНА выявляются при связывании с внутриклеточными антигенами клеток НЕр-2.

При исследовании эпителиальные клетки НЕр-2 выращивают на стеклах, фиксируют и инкубируют с разведенной сывороткой крови пациента. После удаления избытка сыворотки клетки инкубируют с меченными флюоресцеином антителами, затем снова промывают и исследуют с помощью флюоресцентного микроскопа. При этом определяется титр антител и тип свечения. Диагностически значимым считается титр более 1:160. При обострении ревматических заболеваний он превышает 1:640, а в период ремиссии снижается до 1:160-1:320. Чем больше антител, тем выше титр. По типу свечения можно установить мишени антинуклеарных антител, что имеет важное клиническое значение и определяет тактику дальнейшего обследования пациента. Основными являются периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы окрашивания ядра. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.

Гомогенное (диффузное) окрашивание связано с наличием антител к двуспиральной ДНК, гистонам и характерно для СКВ и лекарственной волчанки.

Периферическое свечение обусловлено периферическим распределением хроматина в ядре, связано с антителами к ДНК и специфично для СКВ. Данный тип свечения важно дифференцировать от окрашивания ядерной мембраны, которое происходит при аутоиммунных заболеваниях печени.

Гранулярное (крапчатое, сетчатое) окрашивание встречается наиболее часто и является наименее специфичным, выявляется при многих аутоиммунных заболеваниях. Аутоантигенами в данном случае выступают нуклеопротеиновые комплексы в ядре (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA).

Очень высокие титры АНФ с крупногранулярным типом свечения часто указывают на смешанное заболевание соединительной ткани.

Нуклеарное (ядрышковое) окрашивание обусловлено антителообразованием к компонентам ядрышка (PHК-полимераза-1, NOR, U3RNP, PM/Scl), выявляется при склеродермии, болезни Шегрена. АНА иногда повышаются при эндокринных заболеваниях (сахарном диабете 1-го типа, тиреоидите, тиреотоксикозе, полиэндокринном синдроме), кожных заболеваниях (псориазе, пузырчатке), при беременности, после трансплантации органов и тканей, у больных на гемодиализе.

Центромерное свечение появляется при наличии антител к центромерам хромосом и характерно для формы склеродермии — CREST-синдрома.

Цитоплазматический тип свечения связан с антителами к тРНК-синтетазе, в частности к Jo-1, что характерно для дерматомиозита и полимиозита. Данный тип окрашивания также определяется при наличии антител к другим компонентам цитоплазмы при аутоиммунном гепатите, первичном билиарном циррозе.

Одновременное выявление различных типов свечения указывает на присутствие разных видов антител.

У здоровых людей может быть обнаружено мелкогранулярное свечение при низких, умеренных или высоких титрах АНА, но в норме крупнозернистые или гомогенные типы свечения не должны определяться.

В зависимости от результатов оценки типа свечения разрабатывается дальнейшая тактика лечения пациента и назначаются дополнительные исследования, уточняющие спектр АНА.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани.
• Для дифференциальной диагностики ревматических болезней.
• Чтобы оценить эффективность терапии аутоиммунных заболеваний.
• Для наблюдения за течением системных заболеваний соединительной ткани.

Когда назначается исследование?

• При симптомах аутоиммунного заболевания (длительное повышение температуры, боли в суставах, усталость, потеря массы тела, изменение кожных покровов).
• При выявлении изменений, характерных для системных заболеваний соединительной ткани (повышение СОЭ, уровня С-реактивного белка, циркулирующих иммунных комплексов).

Что означают результаты?

Референсные значения

Результат: отрицательный.

Титр:

Причины повышения титра АНФ на HEp-2 клетках:

• cистемная красная волчанка (в 95 % случаев),
• дерматомиозит/полимиозит,
• системная склеродермия (в 60-90 % случаев),
• синдром Шегрена (в 40-70 % случаев)
• смешанное заболевание соединительной ткани (синдром Шарпа),
• синдром Рейно,
• дискоидная волчанка,
• лекарственная волчанка,
• ревматоидный артрит,
• некротизирующий васкулит,
• инфекционный мононуклеоз,
• лейкемия,
• злокачественные новообразования (преимущественно лимфома),
• тяжелая миастения,
• инфекционный эндокардит,
• хронический аутоиммунный гепатит,
• первичный билиарный цирроз печени,
• туберкулез,
• пневмокониоз,
• интерстициальный фиброз легких.

Типы свечения

Что может влиять на результат?

• Ложноположительному результату способствует:
  • возраст старше 60-65 лет (в 10-37 % случаев);
  • применение лекарственных препаратов, которые могут привести к лекарственной волчанке (ацетазоламид, карбидопа, хлоротиазид, хлорпромазин, клофибрат, этосуксимид, соли золота, гризеофульвин, гидралазин, изониазид, соли лития, метилдопа, пероральные контрацептивы, пенициллин, фенилбутазон, фенитоин, примидон, прокаинамид, пропилурацил, хинидин, резерпин, стрептомицин, сульфаниламид, тетрациклин, тиазидные диуретики).

• Прием глюкокортикостероидов (преднизолон, дексаметазон, метипред) иногда приводит к ложноотрицательному результату.

Важные замечания

• В 5 % случаев СКВ возможен отрицательный результат данного анализа (АНФ-отрицательная СКВ). В таких ситуациях для уточнения диагноза необходимо определить антитела к SS-антигенам (Ro).
• Положительный результат теста не является абсолютным доказательством наличия аутоиммунного заболевания. У здоровых людей в 3-13 % случаев титр АНФ повышен и достигает 1:320.
• Результаты теста необходимо оценивать в комплексе с клиническими данными и другими лабораторными показателями.
• При положительном результате исследования рекомендовано определить специфичность АНА иммуноблотом.

Также рекомендуется

• Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA), скрининг
• Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг
• Антитела к экстрагируемому ядерному антигену (ENA-скрин)
• Антитела к кардиолипину, IgG и IgM
• Антинуклеарные антитела, IgG (анти-Sm, RNP/Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, dsDNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2), иммуноблот
• Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
• Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
• Антистрептолизин О
• С-реактивный белок, количественно
• Ревматоидный фактор
• Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)
• С3 компонент комплемента
• С4 компонент комплемента

Кто назначает исследование?

Ревматолог, иммунолог.

Литература

• Wilson D. McGraw-Hill Manual of Laboratory and Diagnostic Tests 1st Ed Normal, Illinois, 2007: 55-57 pp.
• Mariz HA, Sato EI, Barbosa SH, Rodrigues SH, Dellavance A, Andrade LE. Pattern on the antinuclear antibody-HEp-2 test is a critical parameter for discriminating antinuclear antibody-positive healthy individuals and patients with autoimmune rheumatic diseases. Arthritis Rheum. 2011 Jan;63(1):191-200.
• Kumar Y, Bhatia A, Minz RW. Antinuclear antibodies and their detection methods in diagnosis of connective tissue diseases: a journey revisited. Diagn Pathol. 2009 Jan 2;4:1. PMID: 19121207 [PubMed].

Антинуклеарный фактор (АНФ)

Содержание

1. Описание
2. Дополнительные факты
3. Показания к применению
4. Подготовка
5. Нормальные значения
6. Оценка результатов
7. Причины
8. Цены в 308 клиниках от 220ք

Названия

 Название: Антинуклеарный фактор (АНФ).

Антинуклеарный фактор (АНФ)

Описание

 Антиядерный фактор. Лабораторный анализ направлен на выявление различных типов иммуноглобулинов, специфичных для структур клеточного ядра. Показатель Anf увеличивается при системных заболеваниях соединительной ткани. Тест проводится с целью диагностики, дифференциации, контроля лечения и выявления обострений. Назначается при клинических и лабораторных признаках системной красной волчанки, склеродермии, синдрома Шарпа, синдрома Шегрена, ревматоидного артрита, воспалительной миопатии. Венозная сыворотка крови подвергается методу RNIF. Нормальным показателем является безопасность не более 1: 160. Сроки подготовки тестовых данных — 8 рабочих дней.

Дополнительные факты

 Основой ревматических заболеваний является аутоиммунная реакция против структур клеточного ядра — белковых комплексов и нуклеиновых кислот. Антигены образуются во время запрограммированной гибели эпителиальных клеток и лимфоцитов. Ультрафиолетовые лучи, возбудители инфекций, лекарственные препараты ускоряют разрушение клеток, замедляют выведение апоптотических тел, вызывают развитие аутоиммунных процессов. Антитела, направленные против структур ядра, представлены множеством видов; около восьми в исследовании антиядерного фактора. Преимуществом теста является его высокая специфичность — определяются антитела, которые невозможно очистить для ИФА. Тем не менее, часть иммунных комплексов извлекается в плазме во время выполнения RNIF, так что существует риск ложноотрицательного результата.

Антинуклеарный фактор (АНФ)

Показания к применению

 Изучение антиядерного фактора показано при системных заболеваниях соединительной ткани. Основаниями для проведения теста являются:

 • Симптомы ревматизма. Типичные проявления: лихорадка, усталость, слабость, потеря веса, мышечные и суставные боли, сыпь. Тест используется для выявления и дифференциации СКВ, склеродермии, синдрома Шегрена, Шарпа, ревматоидного артрита, воспалительных миопатий.

 • Результаты лабораторных испытаний. Подозрение на ревматическое заболевание возникает с увеличением СОЭ, уровня С-реактивного белка и ЦИК. Тест назначен для подтверждения диагноза.

 • Диагностика ревматизма. Анализ проводится несколько раз в год (частота определяется индивидуально) с целью проверки течения заболевания, после курса применения иммунодепрессантов, для оценки эффективности терапии.

Подготовка

 Биоматериалом для определения антиядерного фактора является венозная кровь. Процедура забора проводится утром. Правила приготовления следующие:

 • Последний прием пищи должен быть сделан максимум за 4 часа. Питьевая вода разрешена в любое время.

 • Алкоголь, физические нагрузки, эмоциональные переживания должны быть исключены за день до процедуры.

 • Об употреблении наркотиков следует обсудить с врачом. Некоторые лекарства вызывают выработку антител, выработку лекарств от волчанки. На фоне приема глюкокортикостероидов могут быть получены ложноотрицательные данные.

 • Инструментальные диагностические процедуры, физиотерапия должна проводиться после сдачи крови.

 • Курение запрещено в последние 30 минут перед процедурой.

 В лаборатории сыворотка выделяется из крови. Определение антиядерных антител проводят методом FIT с использованием культуры клеток HEp-2. Титр оценивается по более высокому разведению биоматериала, который выявляет яркость ядерных структур, тип иммуноглобулинов по характеру флуоресценции. Время анализа составляет от 6 до 8 дней.

Нормальные значения

 Обычно результат исследования антиядерного фактора отрицательный. Название не более 1: 160 для взрослых и детей. При интерпретации окончательного значения учитываются следующие наблюдения:

 • Низкие титры ANA снижают риск аутоиммунного заболевания, но не исключают его. В 5% случаев результат отрицательный: тест на антиген SS.

 • Получение нормального результата после иммуносупрессивной терапии подтверждает его успех.

 • Отрицательный результат в отношении симптомов аутоиммунной патологии требует дополнительных тестов (NCA, ANA по ELISA).

Оценка результатов

 Антиядерные антитела не обладают цитотоксическими свойствами, но после их связывания с антигенами образуются иммунные комплексы, которые вызывают воспаление в стенках сосудов. Они проявляются поражениями кожи, почечных клубочков, оболочек суставов, плевры. Симптомы, характерные для системных патологий, развиваются. По типу свечения с минимальным разбавлением сыворотки определяются возможные заболевания:

 • однородный. Диффузная флуоресценция свидетельствует о наличии антител к ДНК, гистонам. Определяется СКВ и лекарственной волчанкой.

 • периферийные. Тип свечения обусловлен расположением хроматина, обнаруженного в присутствии Ig к компонентам ДНК, специфичным для СКВ.

 • гранулированный. Антигены представляют собой нуклеопротеиновые комплексы. Свечение неспецифическое, встречается при многих ревматических заболеваниях. Высокий титр и крупнозернистая флуоресценция наиболее характерны для синдрома Шарпа.

 • ядерный. Отражает наличие Ig, специфического для структур ядрышка. Обнаруживает склеродермию и синдром Шегрена. Редко наблюдается при эндокринопатии, кожных патологиях, пересадках органов.

 • Центромерный. Антигены являются хромосомными центромерами. Свечение подтверждает ограниченную склеродермию.

 • цитоплазматический. Это обусловлено наличием антител, направленных против тРНК-синтетазы (Jo-1), рибосом и органелл. Позволяет выявить воспалительные миопатии, аутоиммунные поражения печени.

 • митохондриальный. Антигены являются компонентами комплекса пируватдекарбоксилазы. Люминесценция характерна для первичного билиарного цирроза.

 • Пятно. Связано с циркуляцией антител, направленных против нуклеопротеинов, связанных с аутоиммунными поражениями печени.

Причины

 Снижение имеет прогностическое значение при мониторинге системных заболеваний соединительной ткани. Уровень АНА связан с активностью патологических процессов, поэтому снижение их концентрации является признаком ремиссии и успеха терапии.

Цены в клиниках